大花蕙蘭組織培養(yǎng)工廠化生產技術

    一、啟動誘導
    （一）母株的選擇。母株的選擇應遵循三項基本原則：1.整個群體表現出該品種的典型性狀；2.群體生長發(fā)育良好，沒有普遍發(fā)生特定病害浸染，特別是東亞蘭花葉病毒，齒舌蘭輪斑病毒；3.在符合上述條件的群體中選擇性狀優(yōu)異的健壯單株作母株。
    （二）外植體處理。選擇葉片未完全展開的肥壯營養(yǎng)芽（勿選花芽）為外植體，先剝去2～3片外層葉片，再手持蘭花葉芽梢，切去基部勝物及損傷、老化組織，最后逐層剝凈外層葉片，直至有小頂芽和小側芽露出。然后在超凈工作臺上先用70%的酒精浸泡外植體30秒，用無菌水沖洗后，再放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡8分鐘左右，再用無菌水沖洗3～4次，然后在無菌接種盤上小心切下頂芽和側芽。
    （三）圓球莖誘導與馴化。將切下的頂芽和側芽插入誘導培養(yǎng)基中，基部向下，稍稍露出芽尖。然后將其置于培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)，光照強度1000～1500勒克斯，光照時間每天14小時，培養(yǎng)溫度25℃左右。10天后芽開始萌動，誘導率在85%以上。在圓球莖的誘導過程中，有80% 左右的芽萌發(fā)后很容易長成小苗。誘導30天后，待小苗長至4厘米、基部膨大時，將苗切離基部，并將膨大基部縱切成厚3～4毫米的薄片，切口向下重新放入相同的新鮮培養(yǎng)基中，30～35天從下端切口部位可長出類似愈傷組織的圓球莖，其中頂芽誘導率最高，誘導速度也最快，側芽次之。
    二、繼代增殖和幼苗分化將圓球莖接種于繼代培養(yǎng)基中，然后將其置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃左右，光照強度3000勒克斯，光照時間每天10小時。每 45～50天繼代一次，增殖倍數可在10倍以上。繼代增殖初期用濃度為1.5×10-6至2×10-6的6-BA（植物生長調節(jié)劑）可以較快地積累材料，隨著繼代次數的增加，特別是15代以后或變異株開始出現后，只能用濃度為0.5×10-6至1.5×10-6的6-BA（植物生長調節(jié)劑），并在生產中及時淘汰變異的圓球莖。變異的圓球莖表面只是光滑一片，沒有芽尖，不能分化出芽苗。當圓球莖繼代到所需數量時，直接將完整的圓球莖轉移到新鮮的增殖培養(yǎng)基中，不要縱切分割，也不要切除芽尖，讓圓球莖表面的芽尖直接分化萌發(fā)為小苗。
    三、生根與煉苗當苗長至3厘米高、有2～3片葉時，即可將苗小心切離基部，轉入壯苗生根培養(yǎng)基中，然后將其置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～28℃，光照強度5000～6000勒克斯，光照時間每天12小時，20天左右開始生根，35天可進行煉苗。大花蕙蘭瓶苗移栽前先移入遮陽棚內，在自然散射光下（7000～8000勒克斯），光照時間每天8～12小時的環(huán)境中放置15～20天，可明顯提高瓶苗的質量和栽植成活率。當瓶苗葉色濃綠、葉片堅挺、植株健壯時，即可出瓶移栽。