月季組織培養(yǎng)技術(shù)

   發(fā)布日期:2016-07-30    
核心提示: 月季花(學(xué)名:Rosa chinensis Jacq.):被稱為花中皇后,又稱月月紅,是常綠、半常綠低矮灌木,四季開花﹐一般為紅色﹐或粉色
    月季花(學(xué)名:Rosa chinensis Jacq.):被稱為花中皇后,又稱“月月紅”,是常綠、半常綠低矮灌木,四季開花﹐一般為紅色﹐或粉色、偶有白色和黃色﹐可作為觀賞植物,也可作為藥用植物,亦稱月季。有三個自然變種,現(xiàn)代月季花型多樣,有單瓣和重瓣,還有高心卷邊等優(yōu)美花型;其色彩艷麗、豐富,不僅有紅、粉黃、白等單色,還有混色、銀邊等品種;多數(shù)品種有芳香。月季的品種繁多,世界上已有近萬種,中國也有千種以上。


 
    月季組織培養(yǎng)技術(shù)
    一、培養(yǎng)意義
    月季屬薔薇科薔薇屬多年生草本植物,每年多次開花,而且香味怡人,在觀賞植物中地位很高。另一大優(yōu)點是分布極廣,適應(yīng)性強,栽培容易。使得月季無愧于“花中皇后”之美譽,古今中外文人墨客詠嘆月季的佳作,不勝枚舉。多倫縣就是一個月季之鄉(xiāng),但品種比較單一,更新?lián)Q代緩慢。隨著組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用,多倫縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心于2000年11月引進組織培養(yǎng)全套設(shè)備,成功培育了大量優(yōu)質(zhì)月季組培苗,填補了市場空白,對加速新老品種更新?lián)Q代,迅速普及名優(yōu)新品種起到了重要作用。
    二、培養(yǎng)程序
    (一)無菌培養(yǎng)的建立
    (1)選條
    從中國科學(xué)院、中國農(nóng)科院等一級科研機構(gòu)引進6個月季優(yōu)良品種,分別是“紅雙喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金絲鳥”。選取生長健壯的當(dāng)年生枝條,用飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽作為外植體。以枝條中段芽最好,因為接種后,中段芽第5天左右就能萌發(fā),而基部和梢部的芽往往遲至15天才萌發(fā)。
    (2)培養(yǎng)基的配制
    整個培養(yǎng)過程都可用MS培養(yǎng)基,誘導(dǎo)芽萌發(fā)所加的植物激素只需要BA一種即可,每升用0.3~1.0mg,6個品種均適用,只是萌發(fā)遲早有些差別。
    (3)清洗外植體
    采回的枝條切去葉,再剝?nèi)ジ皆谇o上的葉柄及皮刺,先整段用洗手刷沾濃洗衣粉水仔細(xì)刷洗,再用自來水沖洗,毛巾擦干,放置在小木板上,用利刀切成2~3厘米一段,每段至少一個側(cè)芽,裝入消毒過的培養(yǎng)皿,放在超凈工作臺上,打開紫外燈,做表面滅菌30分鐘。
    (4)消毒與接種
    在超凈工作臺上,用飽和漂白粉上清液作表面滅菌25~30分鐘,滅菌時間快到時,即傾去滅菌溶液,用無菌水涮洗數(shù)次,無菌紗布吸干莖段外表水分,按無菌操作要求,接種到小試管里,從芽萌發(fā)到芽長到1厘米左右需要2~3周。
    (5)培養(yǎng)
    培養(yǎng)溫度21℃最好,最高不超過25℃,有晝夜溫差,光照10~12小時/天,光強800~1200LX。
    (二)繼代增殖
    (1)將上述無菌芽從原莖段上切下,轉(zhuǎn)接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培養(yǎng)基上,促使嫩莖長出更多的側(cè)芽,原莖段棄去。繼代增殖培養(yǎng)基每升用蔗糖30克。
    (2)5周后,“紅雙喜”增殖了3.5倍,“白雪山”4.1倍,“和平”、“彩云”5~6倍,“皇冠”、“金絲鳥”達(dá)15倍。
    (3)每5~6周做一次繼代增殖,繼代前先制備好培養(yǎng)基,然后在無菌操作條件下,將月季嫩莖切成1~2節(jié)一段,投入新鮮的增殖培養(yǎng)基上,月季小苗就會按幾何級數(shù)增殖起來,也可以將大苗轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基上。
    (4)壯苗培養(yǎng)
    ①對增殖倍率高的品種,所增殖的嫩莖很細(xì)弱,要求進行一次壯苗培養(yǎng),以取得適合生根和今后移栽的苗子。壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1,如果并不特別強調(diào)養(yǎng)殖速度,也可以一直使用這種培養(yǎng)基,以壯苗為主,增殖為輔,使增殖與壯苗合為一步。②培養(yǎng)條件。光照10~12小時/天,光強800~1800LX,溫度20~23℃,最高24~26℃。
    (5)生根與移栽
    月季嫩芽生長到一定長度時,就應(yīng)切割下來,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。切下的嫩芽長度以2~3厘米為宜,讓幼苗基部傷口愈合,已長出根原基,幼根尚未長出,即出瓶種植。這種方法不會損傷根系,移栽速度快,成活率高。
    (a)以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ),配方為MS+NAA0.5,此外加入300mg/L活性炭,30g/L蔗糖。插植2厘米以上無根嫩莖,經(jīng)2周左右出現(xiàn)根原基,幼根尚未長出即出瓶種植。
    (b)移栽。幼苗出瓶后,先洗去沾附的瓊脂培養(yǎng)基,再種植到粗沙+園田土(1:3)介質(zhì)中,總的原則是疏松透氣,有一定的保水、保肥能力。種植密度2~3厘米×4~6厘米/株,移栽完畢澆透水,并用0.1%的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗,能顯著提高成活率。
    (c)移栽后管理。移栽后需保持相對濕度85%以上,在溫室、拱棚中移栽,覆好遮蔭網(wǎng),一般成活率都比較高,并注意通風(fēng)和溫度管理。4~6周后,須做好第二次移植,通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中,每杯種1苗,再經(jīng)4~6周,地上、地下部分都充分生長,有些植株還能開花,此時即可出售,或上盆種植,利于觀賞。
    (d)移栽后植保工作。首次移栽1周后,可少量的追肥,視苗大小,濃度逐漸由0.1%提高到0.3%左右,施用種類有復(fù)合肥、尿素、磷酸二氫鉀,MS培養(yǎng)液等,通常每7~10天噴一次殺菌劑,如百菌清等保苗,也可結(jié)合噴藥施肥,以減少管理用工。試管苗第二次移栽后,管理上仍不可放松,須注意除草、施肥、防治病蟲害,及時掐去頂芽,尤其是花蕾,以促進側(cè)芽的生長,促使早日壯大。
    三、影響月季增殖的因素
    1.BA用量及側(cè)芽在莖段上的位置對側(cè)芽發(fā)育的影響。用“和平”品種月季的枝條,均等分為6段,取每段的一個側(cè)芽培養(yǎng)在無激素的MS基本培養(yǎng)基上,23天后可見接近枝條最頂端和緊挨著枝條基部的芽發(fā)育最慢,而枝條中部的芽發(fā)育比較快。
    在不同濃度BA的MS培養(yǎng)基上,BA含量為0.03~0.3毫克/升的培養(yǎng)基,促進“皇冠”“彩云”側(cè)芽的發(fā)育,如果BA超過0.3mg/L,則延遲芽的發(fā)育,但對于莖段中部的芽影響較小。
    2.摘心對莖增殖的影響。在繼代培養(yǎng)的接種操作時,切去嫩芽的頂芽后,再轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上,對嫩芽增殖有很大的促進作用。
    3.赤霉素的影響。試用了赤霉素,其濃度為0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升,試驗發(fā)現(xiàn)所有濃度都抑制莖增殖,隨著其濃度增高,莖增殖數(shù)下降,赤霉素濃度增加,還出現(xiàn)細(xì)長的嫩莖和發(fā)育不全的葉子,畸型植株等。
    4.嫩芽長度對形成多芽苗的影響。莖尖在1~10毫米長短時,對形成多芽苗最有效,不但百分率高,而且每個莖段的側(cè)枝數(shù)也比較多,切割過短或過長都對莖的增殖不利,芽苗形成較少。切割過長會表現(xiàn)出葉子衰老等不利的現(xiàn)象,最適宜的莖尖長度為6~10毫米。
    5.每次繼代培養(yǎng)所需時間對嫩莖增殖的影響。在MS+BA3+IAA0.3的培養(yǎng)基上,“紅雙喜”月季的培養(yǎng)時間為28天,繼代一次較好,超過28天,莖的數(shù)目已不再增加。
    6.MS配方和無機鹽濃度。試驗證明,全量的MS無機鹽對莖增殖效果最好。
    四、影響月季生根和移栽成活率的因素
    1.不同生長素種類和濃度對月季生根和移栽成活率的影響。以“彩云”為材料,用NAA、IAA兩種不同濃度的生長素做生根試驗,發(fā)現(xiàn)用NAA誘導(dǎo)生根和提高移栽成活率效果最好,濃度為100ppm為宜,發(fā)現(xiàn)以IAA誘導(dǎo)生根和提高移栽成活率效果并不理想,其濃度只能在1mg/L以下,超過時對生根的促進作用已不顯著,反而大幅度降低移栽成活率。
    2.無機鹽濃度和含糖量對月季生根的影響。采用較低濃度的無機鹽對月季生根效果較好。但糖濃度不可降低。否則削弱苗的生長勢。試驗證明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。
    3.瓊脂用量及對生根的影響。瓊脂粉用量在4~5克/升的范圍內(nèi)對生根效果影響沒有顯著差別,以4克/升稍優(yōu),用最小不利于凝固,用量大培養(yǎng)過硬不利于扎根。
    五、結(jié)論
    用組織培養(yǎng)的方法生產(chǎn)月季試管苗不僅生產(chǎn)周期短,而且養(yǎng)殖倍數(shù)高,周年均可生產(chǎn),年可生產(chǎn)月季試管苗50萬株,經(jīng)濟效益,社會效益都很可觀,建議業(yè)界同仁能夠關(guān)注此項事業(yè)。
 
 
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