日本圓葉海棠(MalusprunifoliaBorkhvar.ringoAsami),別名丸葉海棠,是日本培育蘋果苗木中廣泛應(yīng)用的一種基砧,其顯著特點是扦插繁育能力強,扦插成活率可達90%以上。經(jīng)過組培脫毒的圓葉海棠生長量大,抗逆性強,嫁接親和性好,具有更穩(wěn)定的生長勢,用圓葉海棠扦插養(yǎng)殖取代實生播種養(yǎng)殖是蘋果育苗中的一次革命。本文建立的Et本圓葉海棠快繁體系,可在短期內(nèi)獲得大量無毒無性系砧木,實現(xiàn)周年生產(chǎn),滿足蘋果苗木生產(chǎn)對砧木的需求。
1、培養(yǎng)條件
①誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L;②增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L;③壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L;④生根培養(yǎng)基:1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.2mg/L。前3種培養(yǎng)基均加蔗糖35g/L,生根培養(yǎng)基蔗糖為23g/L,pH值5.8,培養(yǎng)溫度為25.t2,光照強度為1500~2000Lx,光照時間為14小時/天。
2、生長與分化情況
2.1無菌材料的處理
選取日本圓葉海棠春季萌發(fā)抽生的新梢莖尖或帶腋芽的莖段,剪成長3~5cm的莖段置于三角瓶中,先用少許洗衣粉浸洗2~3分鐘,然后用自來水沖洗到?jīng)]有泡沫為止,在超凈工作臺上,用0.1%HgCl:消毒8分鐘,再用無菌水淋洗5~6次,濾紙吸干水分,剪成長1~2cm的單芽莖段或帶幾個較小葉片的莖尖,接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
2.2不定芽的分化及叢生芽增殖
芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天后開始萌動,伸長成無菌苗。在無菌條件下,將上述伸長苗再切段,每段1~2個芽,接人增殖培養(yǎng)基中,30天后可產(chǎn)生大量叢生芽,將叢生芽再切段,接種在相同培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。增殖系數(shù)為7~8。
2.3壯苗培養(yǎng)
在增殖培養(yǎng)基中,獲得大量的叢生芽,但芽分化較多,植株生長較細弱,因此,將經(jīng)過繼代增殖的小植株,在生根前接種在壯苗培養(yǎng)基中,進行壯苗培養(yǎng),獲得健壯的無根試管苗。
2.4誘導(dǎo)生根及移栽
取株高2.5~3cm小苗接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)2周左右,生根率達98%。然后在調(diào)控溫室馴化生根20天,當(dāng)試管苗根長2~3cm、莖干微呈紅色、葉大而濃綠時,開口練苗3天,然后用鑷子夾出試管苗,栽入已配好營養(yǎng)土(珍珠巖、麥茬土和河沙按1:2:1混合)的六棱型營養(yǎng)缽中,用0.1%多菌靈消毒后,保持80%的濕度,兩周后開始長出新根和新葉,成活率達86%。當(dāng)長出2~4片真葉時開始移人大田,成活率達98%。
①誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.03mg/L;②增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L;③壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L;④生根培養(yǎng)基:1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.2mg/L。前3種培養(yǎng)基均加蔗糖35g/L,生根培養(yǎng)基蔗糖為23g/L,pH值5.8,培養(yǎng)溫度為25.t2,光照強度為1500~2000Lx,光照時間為14小時/天。
2、生長與分化情況
2.1無菌材料的處理
選取日本圓葉海棠春季萌發(fā)抽生的新梢莖尖或帶腋芽的莖段,剪成長3~5cm的莖段置于三角瓶中,先用少許洗衣粉浸洗2~3分鐘,然后用自來水沖洗到?jīng)]有泡沫為止,在超凈工作臺上,用0.1%HgCl:消毒8分鐘,再用無菌水淋洗5~6次,濾紙吸干水分,剪成長1~2cm的單芽莖段或帶幾個較小葉片的莖尖,接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
2.2不定芽的分化及叢生芽增殖
芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天后開始萌動,伸長成無菌苗。在無菌條件下,將上述伸長苗再切段,每段1~2個芽,接人增殖培養(yǎng)基中,30天后可產(chǎn)生大量叢生芽,將叢生芽再切段,接種在相同培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。增殖系數(shù)為7~8。
2.3壯苗培養(yǎng)
在增殖培養(yǎng)基中,獲得大量的叢生芽,但芽分化較多,植株生長較細弱,因此,將經(jīng)過繼代增殖的小植株,在生根前接種在壯苗培養(yǎng)基中,進行壯苗培養(yǎng),獲得健壯的無根試管苗。
2.4誘導(dǎo)生根及移栽
取株高2.5~3cm小苗接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)2周左右,生根率達98%。然后在調(diào)控溫室馴化生根20天,當(dāng)試管苗根長2~3cm、莖干微呈紅色、葉大而濃綠時,開口練苗3天,然后用鑷子夾出試管苗,栽入已配好營養(yǎng)土(珍珠巖、麥茬土和河沙按1:2:1混合)的六棱型營養(yǎng)缽中,用0.1%多菌靈消毒后,保持80%的濕度,兩周后開始長出新根和新葉,成活率達86%。當(dāng)長出2~4片真葉時開始移人大田,成活率達98%。